eIF4AI Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402623-ACT

EIF4A1 codifica a helicase de RNA DEAD-box eIF4AI humana, um componente central da maquinaria de iniciação da tradução eIF4F que desenrola 5′ UTRs estruturadas para facilitar o escaneamento do complexo de pré-iniciação 43S e o reconhecimento do códon de início. Ao regular a eficiência da tradução dependente de cap, a eIF4AI influencia a produção do proteoma, a progressão do ciclo celular e programas adaptativos ao estresse, e interage funcionalmente com a sinalização de mTOR e com respostas integradas ao estresse que remodelam a tradução de mRNAs. A alteração do controle da tradução dependente de eIF4A tem sido associada à desregulação de vias de crescimento e sobrevivência observada em múltiplos contextos de doença, tornando o EIF4A1 um nó amplamente utilizado para investigar mecanismos de controle translacional.

eIF4AI O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EIF4A1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

eIF4AI O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EIF4A1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EIF4A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de eIF4AI. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EIF4A1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de eIF4AI no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via eIF4AI em células tumorais com expressão de EIF4A1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.