eIF2S3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-406266-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- eIF2S3 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- eIF2S3ダブルニカースプラスミド（h）およびeIF2S3ダブルニカースプラスミド（h2）は、EIF2S3を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
eIF2S3 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-406266-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
eIF2S3 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-406266-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF2S3 は、真核生物翻訳開始因子 2（eIF2）のガンマサブユニット（eIF2γ）をコードしており、キャップ依存的な翻訳開始の過程で開始 Met-tRNAi を 40S リボソームサブユニットへ運搬する eIF2 三者複合体の中核構成要素です。eIF2S3 は、全体的なタンパク質合成量の制御に加え、統合ストレス応答（ISR）に関連する選択的翻訳プログラムの制御にも関与します。ISR では eIF2α のリン酸化が開始反応の動態を変化させ、mRNA 翻訳を再プログラムします。これらの経路を介して、EIF2S3 はさまざまな細胞種におけるプロテオスタシス、細胞周期の進行、ストレス適応に影響を与えます。EIF2S3 の遺伝学的破綻や発現・機能の異常は、神経発達に関わる表現型や X 連鎖性の症候群性疾患と関連しており、疾患関連モデルにおける翻訳制御の機構研究において重要な標的となります。
eIF2S3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EIF2S3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EIF2S3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EIF2S3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EIF2S3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。