eIF2C CRISPR Activationプラスミド (h): sc-409888-ACT

ヒトAGO1（eIF2C1）遺伝子は、Argonauteファミリーに属するタンパク質をコードしており、RNA誘導サイレンシング複合体（RISC）の中核構成因子です。AGO1はmiRNAやsiRNAなどの小分子RNAを介して、標的転写産物に対する配列特異的な抑制を仲介します。小分子RNAにガイドされた結合を通じて、eIF2Cは転写後の遺伝子制御に関与し、mRNAの安定性や翻訳に影響を与えることで、分化、ストレス応答、ゲノムの制御ネットワーク維持に関連するプログラムを形成します。AGO1依存的なRNAサイレンシングは、細胞アイデンティティを規定する主要なシグナル伝達ノードやフィードバックループを調節することにより、より広範なエピジェネティック制御および転写制御とも交差します。Argonaute/miRNA経路の活性異常は、多様ながんや神経疾患、炎症性疾患で観察される遺伝子発現ランドスケープの変化と関連づけられており、AGO1はRNA制御機構を解析するうえで有用な手がかりとなります。

eIF2C CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性AGO1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

eIF2C CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における AGO1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAGO1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性eIF2Cの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAGO1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるeIF2C依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAGO1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるeIF2C経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。