eIF2Bδ CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420143

概要

Eif2b4は、eIF2-GDPをeIF2-GTPへ再活性化するグアニンヌクレオチド交換因子eIF2Bのδサブユニットをコードしており、これによって翻訳開始を制御する。三者複合体の利用可能性を調節することで、eIF2Bは統合ストレス応答（ISR）の中で栄養状態やストレスのシグナルを統合し、eIF2αのリン酸化依存的なタンパク質合成調節とも交差する。eIF2B活性は、プロテオスタシス、細胞増殖、ならびに小胞体（ER）ストレスや酸化ストレスに関連する適応的転写プログラムに影響を与える。eIF2Bサブユニットの機能異常は低髄鞘化白質ジストロフィーの経路と関連しており、Eif2b4は神経系およびグリア系におけるストレス感受性の高い翻訳制御を研究する上で重要なノードとなる。

eIF2Bδ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEif2b4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Eif2b4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Eif2b4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、eIF2Bδタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、eIF2Bδシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Eif2b4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• eIF2Bδの機能に不可欠なEif2b4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Eif2b4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• eIF2Bδ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびeIF2Bδ CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Eif2b4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  eIF2Bδ HDRプラスミド（m）および eIF2Bδ HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEif2b4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEif2b4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。