eIF2Bα CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404034-ACT

EIF2B1 は、真核生物翻訳開始因子 2B（eIF2B）の調節サブユニットである eIF2Bα をコードします。eIF2B はグアニンヌクレオチド交換因子として、GDP から GTP への交換反応を触媒し、eIF2 を再活性化します。eIF2B は統合ストレス応答（ISR）からのシグナルを統合し、ER ストレス、栄養制限、ウイルス感染などの状況において、eIF2α のリン酸化を介した全体的な翻訳抑制と、ストレス応答性 mRNA の選択的翻訳とを結び付けます。翻訳開始速度を制御することで、eIF2Bα はプロテオスタシス、細胞の生存・死の意思決定、ならびに代謝適応に影響します。eIF2B 活性の破綻は、EIF2B 関連白質ジストロフィーを含む神経発達・神経変性表現型と関連しており、EIF2B1 はヒト細胞におけるストレスシグナル伝達と翻訳制御を研究する上で有用な標的（ノード）です。

eIF2Bα CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EIF2B1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

eIF2Bα CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EIF2B1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEIF2B1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性eIF2Bαの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEIF2B1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるeIF2Bα依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEIF2B1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるeIF2Bα経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。