EGFR Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-420131-LAC

Il gene murino *Egfr* codifica il recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR), una tirosin-chinasi recettoriale che regola proliferazione, sopravvivenza, migrazione e differenziamento attraverso dimerizzazione e autofosforilazione indotte dal ligando. EGFR trasduce il segnale tramite le vie canoniche MAPK/ERK, PI3K–AKT–mTOR, JAK/STAT e PLCγ–PKC, coordinando la progressione del ciclo cellulare e le risposte allo stress. Nei modelli murini, un’alterata attività di EGFR perturba l’omeostasi epiteliale e i programmi di sviluppo ed è ampiamente utilizzata per studiare la deregolazione della segnalazione di crescita rilevante per la trasformazione oncogena e il rimodellamento tissutale. Le reti dipendenti da EGFR intersecano inoltre il traffico endocitico, l’inibizione per feedback e il crosstalk con altri RTK, rendendo *Egfr* un nodo chiave per la mappatura delle vie di segnalazione.

Le particelle di attivazione lentivirale EGFR (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Egfr in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale EGFR (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Egfr, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di EGFR. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Egfr e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.