EF-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401163

Panoramica

L’EEF2 umano codifica il fattore di allungamento 2 (EF-2), un componente fondamentale del ciclo di allungamento della traduzione che guida la traslocazione del ribosoma sull’mRNA e sostiene la sintesi proteica globale. L’attività di EF-2 è strettamente collegata ai segnali di nutrienti e stress tramite la fosforilazione mediata da EF2K e interseca il controllo della traduzione regolato da mTOR, collegando la dinamica ribosomiale alla crescita cellulare e all’adattamento metabolico. La perturbazione di EEF2 influenza la proteostasi, la progressione del ciclo cellulare e le risposte allo stress, e un’alterata regolazione di EF-2 è stata riportata in diversi contesti caratterizzati da proliferazione disregolata e processi neurobiologici. In quanto nodo centrale del controllo della traduzione, EEF2 viene studiato di routine nei percorsi che governano la funzione del ribosoma, la segnalazione integrata dello stress e la traduzione selettiva in condizioni di stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EF-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene EEF2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del EEF2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto EEF2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EF-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di EEF2 per lo studio della segnalazione di EF-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni EEF2 critici per la funzione di EF-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di EEF2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EF-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal EF-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus EEF2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EF-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR EF-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia EEF2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio EEF2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.