EF-1 δ Plasmide Double Nickase (h): sc-405987-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EF-1 δ Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il EF-1 δ Double Nickase Plasmid (h) e il EF-1 δ Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EEF1D. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EF-1 δ Antibody (A-5): sc-393731
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EF-1 δ Plasmide Double Nickase (h) | sc-405987-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EF-1 δ Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405987-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EEF1D codifica il fattore di elongazione 1-delta (EF-1δ), un componente del complesso eEF1 che supporta l’elongazione della traduzione dell’mRNA promuovendo la consegna dei tRNA aminoacilati al sito A del ribosoma e coordinando lo scambio di nucleotidi su eEF1A. Oltre alla sintesi proteica di base, EF-1δ contribuisce al controllo traslazionale legato alla crescita cellulare, alla proteostasi e alla segnalazione responsiva allo stress, collegando l’attività ribosomiale a reti regolatorie più ampie. Alterazioni dell’espressione o della funzione di EEF1D sono state associate a cambiamenti dell’omeostasi della traduzione e a programmi di adattamento cellulare che vengono frequentemente rimodellati in contesti proliferativi e neurodegenerativi. Di conseguenza, EEF1D rappresenta un nodo utile per studiare come il macchinario di traduzione si interfacci con le vie che governano la progressione del ciclo cellulare e le risposte allo stress.
EF-1 δ Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EEF1D nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EEF1D. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EEF1D. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EEF1D interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.