EDAR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405342-ACT

EDAR codifica o receptor da ectodisplasina A, um membro da superfamília de receptores de TNF que medeia a sinalização epitélio–mesênquima durante o desenvolvimento dos folículos pilosos, dos dentes e das glândulas sudoríparas écrinas. A ativação de EDAR dependente de ligante recruta proteínas adaptadoras como a EDARADD para propagar a sinalização de NF-κB e programas transcricionais a jusante que controlam a formação de placódios, a diferenciação de queratinócitos e a morfogênese de anexos cutâneos. A atividade desregulada da via de EDAR está associada a fenótipos de displasia ectodérmica e a anomalias do desenvolvimento que afetam os anexos da pele. Em modelos celulares humanos, o EDAR funciona como um nó mecanístico para estudar a regulação transcricional ligada a NF-κB em epitélios estratificados e em sistemas de organoides.

EDAR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EDAR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EDAR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EDAR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EDAR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EDAR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EDAR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EDAR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EDAR em células tumorais com expressão de EDAR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.