ECP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404327
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ECP Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico ECP, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ECP Antibody (C3): sc-517595
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ECP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-404327 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
RNASE3 codifica la proteina cationica degli eosinofili (ECP), una ribonucleasi associata ai granuli rilasciata dagli eosinofili attivati durante le risposte immunitarie. L’ECP presenta attività antimicrobiche e citotossiche e contribuisce al rimodellamento tissutale mediato dagli eosinofili attraverso interazioni con le membrane cellulari, i componenti della matrice extracellulare e la segnalazione dell’immunità innata. L’espressione di RNASE3 e la degranulazione sono collegate all’infiammazione di tipo 2 e alle risposte eosinofiliche che influenzano la biologia delle mucose delle vie aeree, della pelle e del tratto gastrointestinale. Livelli alterati di ECP sono spesso utilizzati come indicatore molecolare dell’attivazione degli eosinofili nella ricerca sulle malattie infiammatorie, inclusi l’asma e altri disturbi allergici.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ECP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RNASE3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RNASE3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RNASE3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ECP.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RNASE3 per lo studio della segnalazione di ECP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni RNASE3 critici per la funzione di ECP
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RNASE3 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal ECP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ECP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RNASE3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal ECP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ECP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RNASE3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RNASE3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.