ECP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404327

概要

RNASE3は、免疫応答の過程で活性化した好酸球から放出される、顆粒関連リボヌクレアーゼである好酸球カチオン性タンパク質（ECP）をコードします。ECPは抗菌活性および細胞傷害性を示し、細胞膜、細胞外マトリックス成分、ならびに自然免疫シグナル伝達との相互作用を通じて、好酸球が介在する組織リモデリングにも寄与します。RNASE3の発現と脱顆粒は2型炎症および好酸球性応答と関連しており、気道、皮膚、消化管粘膜の生物学的特性の形成に影響を与えます。ECPレベルの異常は、喘息を含むアレルギー性疾患などの炎症性疾患研究において、好酸球活性化の分子指標としてしばしば用いられています。

ECP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRNASE3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RNASE3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RNASE3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ECPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ECPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RNASE3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ECPの機能に不可欠なRNASE3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RNASE3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ECP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびECP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RNASE3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ECP HDRプラスミド（h）および ECP HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRNASE3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRNASE3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。