EBF4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402438

概要

EBF4（early B-cell factor 4）は、EBFファミリーに属するヘリックス・ループ・ヘリックス型の転写因子で、DNAに結合して遺伝子発現プログラムを制御し、細胞運命の決定や組織分化に関わります。クロマチン制御や発生シグナル伝達と交差する転写ネットワークを協調的に調節することで、EBF4は神経系や免疫関連の遺伝子発現など、系譜（リネージ）に関連したプロセスに影響を及ぼし得ます。EBFファミリーの転写回路の制御異常は、神経発達表現型やがんに伴う転写リプログラミングなどの文脈で研究されており、そのためEBF4は、分化の破綻を解析するうえで有用な結節点（ノード）となります。EBF4の機能解析により、下流標的の機構的解析、プロモーター／エンハンサーへの結合（占有）、ならびに増殖や細胞アイデンティティに対する経路レベルの影響を検討できます。

EBF4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるEBF4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、EBF4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、EBF4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、EBF4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、EBF4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、EBF4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• EBF4の機能に不可欠なEBF4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、EBF4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• EBF4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびEBF4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、EBF4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  EBF4 HDRプラスミド（h）および EBF4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEBF4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEBF4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。