Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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EAP30 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406312
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- EAP30 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico EAP30, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:EAP30 Anticorpo (C-11): sc-390747
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
EAP30 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-406312 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
SNF8 codifica a EAP30, um componente central do complexo ESCRT-II que coordena a triagem endossomal de proteínas de membrana ubiquitinadas para incorporação em corpos multivesiculares, visando a degradação lisossomal. Por meio de remodelamento de membranas dependente de ESCRT, a EAP30 sustenta a redução de receptores, o tráfego endolisossomal e o acoplamento do ESCRT-II ao ESCRT-III durante a formação de vesículas intraluminais. Esses processos influenciam a atenuação de vias de sinalização, a homeostase de proteínas de membrana e aspectos da citocinese e do brotamento viral que dependem da maquinaria ESCRT. A desregulação do tráfego mediado por ESCRT tem sido associada a alterações na sinalização de receptores de fatores de crescimento, estresse de proteostase e instabilidade genômica, tornando SNF8/EAP30 relevante para estudos de biologia do câncer e de defeitos endolisossomais associados à neurodegeneração.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO EAP30 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SNF8 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SNF8, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SNF8 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína EAP30.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SNF8 para a investigação da sinalização de EAP30, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SNF8 críticos para a função EAP30
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SNF8 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo EAP30 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo EAP30 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SNF8. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo EAP30 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR EAP30 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SNF8 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SNF8 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.