E4BP4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401353

概要

NFIL3は、ベーシック・ロイシンジッパー（bZIP）型転写因子であるE4BP4をコードしており、概日時計からのシグナルを免疫・代謝プログラムと統合する、文脈依存的な遺伝子発現調節因子です。E4BP4は、サイトカインネットワークや生存経路の制御を含め、リンパ系細胞系列にわたる分化およびエフェクター機能に影響し、炎症シグナルの恒常性維持にも寄与します。さらに、細胞ストレス応答や発生タイミングを形作る転写回路とも連携し、リズム性の調節をより広範な遺伝子制御ネットワークへと結び付けます。NFIL3/E4BP4活性の破綻は、研究環境において、免疫介在性の病態、血液学的表現型、ならびに代謝および概日リズムに関連する表現型の変化と関連づけられています。

E4BP4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNFIL3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NFIL3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NFIL3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、E4BP4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、E4BP4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NFIL3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• E4BP4の機能に不可欠なNFIL3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NFIL3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• E4BP4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびE4BP4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NFIL3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  E4BP4 HDRプラスミド（h）および E4BP4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNFIL3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNFIL3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。