E-cadherin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400031-ACT

CDH1 codifica a E-caderina, um recetor de adesão célula–célula dependente de cálcio que forma junções aderentes por ligação homofílica e acoplamento ao citoesqueleto de actina via cateninas. Ao estabilizar a arquitetura epitelial e a polaridade ápico-basal, a E-caderina influencia a inibição por contacto, a função de barreira e a morfogénese tecidular, e articula-se com vias como a sinalização Wnt/β-catenina, que coordenam programas de transcrição com a integridade das junções. A perda, redistribuição ou silenciamento transcricional da E-caderina está frequentemente associada à transição epitélio-mesenquimatosa (EMT), a fenótipos alterados de migração e invasão e a estados de diferenciação perturbados. A desregulação de CDH1 também é relevante em estudos de biologia de supressores tumorais e de predisposição hereditária ao cancro, incluindo cancro gástrico difuso e cancro da mama lobular, bem como em modelos de metástase e desenvolvimento de organoides.

E-cadherin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDH1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

E-cadherin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDH1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDH1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de E-cadherin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDH1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de E-cadherin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via E-cadherin em células tumorais com expressão de CDH1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.