Dynactin 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402369

概要

DCTN1は、細胞質ダイニンをカーゴおよび微小管に連結し、マイナス端方向への連続的（プロセッシブ）輸送を支えるダイナクチン複合体の主要サブユニットであるdynactin 1（p150Glued）をコードします。Dynactin 1は、ダイニン–ダイナクチンモーターの制御を介して、小胞・オルガネラ輸送、エンドソーム–リソソームの配置、ゴルジ体の構造維持、有糸分裂紡錘体の機能、ならびに神経細胞の軸索輸送に寄与します。輸送と細胞骨格動態を協調させることで、DCTN1は、神経細胞のような長寿命細胞におけるプロテオスタシス、オートファジーフラックス、ストレス顆粒の処理に関わる経路にも影響を及ぼします。DCTN1の遺伝学的破綻または機能不全は神経変性様表現型と関連づけられており、モーター駆動輸送の障害機構や神経細胞の脆弱性を解明するための機構研究において重要な標的となります。

Dynactin 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDCTN1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DCTN1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DCTN1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Dynactin 1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Dynactin 1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DCTN1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Dynactin 1の機能に不可欠なDCTN1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DCTN1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Dynactin 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDynactin 1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DCTN1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Dynactin 1 HDRプラスミド（h）および Dynactin 1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDCTN1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDCTN1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。