Dynactin 1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402369

Panoramica

DCTN1 codifica la dynactina 1, la principale subunità p150Glued del complesso della dynactina, che collega la dineina citoplasmatica al carico e ai microtubuli per sostenere un trasporto processivo diretto verso l’estremità meno. La dynactina 1 contribuisce al traffico di vescicole e organelli, al posizionamento endosoma–lisosoma, all’organizzazione dell’apparato di Golgi, alla funzione del fuso mitotico e al trasporto assonale neuronale attraverso la regolazione del motore dineina–dynactina. Coordinando il trasporto e la dinamica del citoscheletro, DCTN1 influenza vie alla base della proteostasi, del flusso autofagico e della gestione dei granuli di stress in cellule a lunga vita come i neuroni. L’alterazione genetica o la disfunzione di DCTN1 è stata collegata a fenotipi neurodegenerativi, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sui difetti di trasporto guidato dai motori e sulla vulnerabilità neuronale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Dynactin 1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DCTN1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DCTN1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DCTN1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Dynactin 1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DCTN1 per lo studio della segnalazione di Dynactin 1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DCTN1 critici per la funzione di Dynactin 1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DCTN1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Dynactin 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Dynactin 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DCTN1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Dynactin 1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Dynactin 1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DCTN1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DCTN1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.