Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3 Double Nickaseプラスミド (m): sc-420082-NIC

マウスDvl3は、Wntシグナル伝達において中心的な足場（スキャフォールド）として機能する細胞質リン酸化タンパク質Dishevelled 3（Dvl-3）をコードする。Dvl-3はFrizzled受容体からのシグナルを下流因子へ伝達し、カノニカルなβ-カテニン依存性転写だけでなく、非カノニカルな平面内細胞極性（PCP）経路やWnt/Ca²⁺経路にも関与して、細胞極性、細胞移動、ならびに細胞骨格リモデリングに影響を与える。これらのネットワークを介してDVL3は胚発生のパターニングおよび組織恒常性の維持に寄与し、Wnt–Dishevelledシグナルの破綻は、がん化シグナル、発生異常、線維化に伴うリモデリングなどにしばしば関与する。したがってDvl3の攪乱は、GSK3β/β-カテニン、JNKシグナル、小型GTPaseを介したアクチン動態といった経路間クロストークを解析するために広く用いられている。

Dvl-3/Dishevelled 3/DVL3 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Dvl3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Dvl3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Dvl3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Dvl3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。