DTYMK Plasmide Double Nickase (h): sc-405508-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DTYMK Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DTYMK Double Nickase Plasmid (h) e il DTYMK Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DTYMK. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DTYMK Antibody (B-8): sc-365925
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DTYMK Plasmide Double Nickase (h) | sc-405508-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DTYMK Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405508-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DTYMK codifica la deossitimidilato chinasi, un enzima citosolico che fosforila il dTMP a dTDP, fornendo dTTP per la replicazione e la riparazione del DNA. Sostenendo un bilanciamento adeguato dei pool di deossinucleotidi, DTYMK contribuisce alla progressione della fase S, alla stabilità del genoma e alle risposte cellulari allo stress replicativo. Alterazioni del metabolismo del timidilato e delle vie di recupero dei nucleotidi possono influenzare la segnalazione del danno al DNA e il carico mutazionale, rendendo DTYMK un nodo utile per studiare l’omeostasi dei nucleotidi in cellule proliferanti e sotto stress. Modifiche dell’espressione o dell’attività di DTYMK sono state investigate in contesti in cui il metabolismo dei nucleotidi viene riprogrammato, inclusa la biologia del cancro e disturbi legati a un mantenimento del DNA compromesso.
DTYMK Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DTYMK nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DTYMK. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DTYMK. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DTYMK interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.