dsg3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401809-ACT

DSG3 codifica a desmogleína-3 (dsg3), uma caderina desmossomal que medeia a adesão célula–célula dependente de cálcio em epitélios estratificados e contribui para a integridade tecidual sob estresse mecânico. A dsg3 atua em conjunto com a plakoglobina, a desmoplaquina e os filamentos intermediários de queratina para organizar a montagem dos desmossomos, regular propriedades da barreira epitelial e influenciar a dinâmica do citoesqueleto. Além da adesão, a sinalização ligada a DSG3 interage com vias que controlam diferenciação e respostas ao estresse, incluindo comunicação cruzada com as vias EGFR/MAPK e com a sinalização de GTPases da família Rho, que podem modular migração e remodelamento de junções. Alterações na expressão de DSG3 ou seu direcionamento por autoanticorpos estão associadas a fenótipos de fragilidade epitelial e à biologia de doenças bolhosas inflamatórias, e sua desregulação tem sido estudada em contextos de invasão tumoral e transições do tipo epitélio-mesenquimal.

dsg3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DSG3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

dsg3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DSG3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DSG3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de dsg3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DSG3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de dsg3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via dsg3 em células tumorais com expressão de DSG3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.