DR6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402038-ACT

ヒトTNFRSF21は、腫瘍壊死因子（TNF）受容体スーパーファミリーに属するデスレセプター6（DR6）をコードしており、受容体介在性の経路を通じて神経発生、免疫シグナル伝達、アポトーシスを調節します。DR6はアダプタータンパク質と相互作用してカスパーゼ活性化に影響を与え、NF-κBおよびMAPKシグナルとも交差して、サイトカイン応答性の転写プログラムを形成します。神経系では、DR6は軸索刈り込みやシナプス再構築に関与するとされ、免疫細胞では活性化や細胞生存の制御に寄与します。TNFRSF21/DR6シグナルの破綻は炎症性表現型と関連づけられており、神経変性や腫瘍学に関わる機序の文脈でも検討されていることから、機能解析研究における経路上のノードとしての有用性が支持されています。

DR6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TNFRSF21の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DR6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TNFRSF21 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTNFRSF21転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DR6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTNFRSF21遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDR6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTNFRSF21発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDR6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。