DPEP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407451

Panoramica

DPEP1 (dipeptidasi 1) codifica una metalloproteasi allo zinco ancorata alla membrana, localizzata prevalentemente sulla superficie apicale delle cellule epiteliali, dove idrolizza una gamma di dipeptidi e metaboliti coniugati al glutatione. Attraverso la sua attività enzimatica, DPEP1 contribuisce al turnover dei peptidi e al metabolismo degli xenobiotici, intersecandosi con i processi di detossificazione dipendenti dal glutatione e con le funzioni di trasporto epiteliale. Alterazioni dell’espressione di DPEP1 sono state riportate in molteplici neoplasie di origine epiteliale e in contesti infiammatori, collegando questo enzima al rimodellamento del microambiente pericellulare e a una gestione metabolica alterata. In quanto ectoenzima con motivi catalitici ben definiti, DPEP1 rappresenta un nodo accessibile per lo studio della biologia delle proteasi di membrana, delle risposte allo stress metabolico e degli stati di differenziamento epiteliale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DPEP1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DPEP1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DPEP1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DPEP1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DPEP1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DPEP1 per lo studio della segnalazione di DPEP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DPEP1 critici per la funzione di DPEP1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DPEP1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DPEP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DPEP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DPEP1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DPEP1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DPEP1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DPEP1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DPEP1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.