DP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422478
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- DP O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico DP, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
DP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422478 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Ptgdr codifica o recetor de prostaglandina D2 DP do rato, um recetor acoplado à proteína G que sinaliza principalmente via Gs para aumentar o cAMP e ativar programas de transcrição dependentes de PKA. O DP é ativado por PGD2 produzida através do metabolismo do ácido araquidónico e contribui para a regulação do tónus do músculo liso, da permeabilidade vascular, da inflamação das mucosas e do tráfego de células imunitárias. Em leucócitos e tecidos de barreira, a sinalização associada ao DP interage com a produção de citocinas e a quimiotaxia, moldando respostas inflamatórias do tipo 2 e a comunicação neuroimunitária. A atividade PGD2–DP desregulada tem sido implicada em modelos experimentais de inflamação das vias aéreas semelhante à asma, doença alérgica e vias de dor inflamatória, tornando o Ptgdr um alvo útil para dissecar a sinalização por mediadores lipídicos.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO DP (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ptgdr em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ptgdr, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ptgdr na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína DP.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ptgdr para a investigação da sinalização de DP, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ptgdr críticos para a função DP
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ptgdr para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo DP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo DP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ptgdr. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo DP Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR DP (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ptgdr para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ptgdr definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.