Doublecortin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (r): sc-437358

概要

Doublecortin（DCX）は神経細胞の微小管関連タンパク質であり、微小管に結合して安定化させることで、神経新生の過程における細胞骨格ダイナミクスを調節します。DCXは遊走中の神経芽細胞や未成熟ニューロンで高発現しており、微小管の重合や細胞内輸送の制御を通じて、神経突起の伸長、ニューロンの極性化、ならびに大脳皮質の層構造形成を支えます。またDCXは、アクチン—微小管の協調、中心体の位置決め、軸索誘導を制御する経路とも交差し、細胞骨格の再編成を発生パターン形成と結び付けます。DCX機能の破綻は神経発達異常や神経回路の結合性変化と関連しており、神経細胞移動や脳発達の研究において広く用いられるマーカーであると同時に、重要な機構的ハブとして位置付けられています。

Doublecortin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（r）は、rat細胞株における遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Doublecortinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Doublecortinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Doublecortinの機能に不可欠なエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Doublecortin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（r）およびDoublecortin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（r2）によってコードされるgRNAは、遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Doublecortin HDRプラスミド（r）および Doublecortin HDRプラスミド（r2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定の標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。