DOC4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406806

概要

TENM4は、テネウリン膜貫通タンパク質4（DOC4）をコードしており、細胞間コミュニケーション、接着、ならびに組織パターン形成や神経回路の結合性に影響する誘導シグナルに関与するとされる大型のII型膜タンパク質です。細胞外ドメインを介した相互作用と細胞内のシグナル伝達モチーフにより、DOC4は細胞骨格の構築、神経突起の伸長、細胞極性の維持に寄与します。TENM4の発現変動や配列変異は神経学的表現型と関連づけられているほか、腫瘍細胞の挙動に関する研究でも報告されており、細胞移動や浸潤プログラムとの関連性が示唆されます。これらの特性から、TENM4は接着依存的シグナル伝達と発生、ならびに疾患関連の細胞リモデリングを結び付ける経路を解析するうえで有用な標的となります。

DOC4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTENM4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TENM4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TENM4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DOC4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DOC4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TENM4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DOC4の機能に不可欠なTENM4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TENM4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DOC4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDOC4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TENM4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DOC4 HDRプラスミド（h）および DOC4 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTENM4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTENM4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。