Dnmt2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420034

Descripción general

Trdmt1 codifica Dnmt2, una metiltransferasa de ARN citosina-5 altamente conservada que modifica predominantemente ARNt (en particular m5C en la citosina 38), influyendo en la estabilidad del ARNt, la fidelidad de decodificación y las respuestas celulares al estrés. Mediante la regulación de la metilación del ARN, Dnmt2 contribuye al control de la traducción y a redes epitranscriptómicas más amplias que se entrecruzan con vías de procesamiento de ARN y de mantenimiento del genoma. La alteración de la actividad de TRDMT1/DNMT2 se ha vinculado con una proteostasis y una adaptación al estrés perturbadas, con relevancia descrita para fenotipos oncogénicos y procesos neurobiológicos en sistemas modelo. En ratón, Trdmt1 se estudia con frecuencia por su papel en la regulación mediada por ARN de la expresión génica, la homeostasis celular y las respuestas dependientes del contexto a estresores ambientales y metabólicos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Dnmt2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Trdmt1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Trdmt1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Trdmt1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Dnmt2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Trdmt1 para la investigación de la señalización de Dnmt2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Trdmt1 críticos para la función de Dnmt2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Trdmt1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Dnmt2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Dnmt2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Trdmt1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Dnmt2 (m) y el plásmido HDR Dnmt2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Trdmt1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Trdmt1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.