Dnmt1 Plasmide Double Nickase (m): sc-420033-NIC

Il gene murino Dnmt1 codifica la DNA (citosina-5)-metiltransferasi 1, la principale metiltransferasi di mantenimento che copia i pattern di metilazione dei CpG sul DNA di nuova sintesi durante la fase S. DNMT1 si coordina con UHRF1, PCNA e fattori associati alla cromatina per preservare l’informazione epigenetica, modellando i programmi trascrizionali, l’imprinting genomico e l’inattivazione del cromosoma X. Stabilizzando la metilazione degli elementi ripetitivi, DNMT1 contribuisce al silenziamento dei trasposoni e all’integrità del genoma, collegando la sua attività alla replicazione del DNA, all’organizzazione della cromatina e alle risposte al danno del DNA. Una metilazione dipendente da DNMT1 deregolata è ampiamente associata a stati alterati di espressione genica nel cancro e a fenotipi epigenetici e neuroevolutivi nei sistemi modello, rendendo DNMT1 un bersaglio comune per studi meccanicistici sul mantenimento dell’epigenoma.

Dnmt1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Dnmt1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Dnmt1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Dnmt1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Dnmt1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.