DND1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404161-ACT

ヒトDND1（dead end protein homolog 1）はRNA結合タンパク質であり、標的mRNA内の特定の配列モチーフを認識して、その安定性や翻訳を調節することで転写後の遺伝子発現を制御します。生殖細胞の発生における役割や細胞アイデンティティの維持で特によく知られており、増殖・分化・生存プログラムに影響するRNAの運命決定を協調的に制御します。DND1は、選択された転写産物に対するマイクロRNAのアクセスを制限することでマイクロRNA介在性の制御と交差するネットワークに関与し、発生過程におけるプロテオーム出力を形作ります。DND1依存的なRNA制御の破綻は、モデル系において生殖系列の生物学的特性の変化や腫瘍関連の表現型と関連づけられており、がん原性リプログラミング、細胞運命転換、RNA制御回路の研究において重要です。

DND1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DND1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DND1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DND1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDND1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DND1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDND1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDND1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDND1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDND1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。