DNA pol ε B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-418231

Panoramica

POLE2 codifica la subunità B della DNA polimerasi epsilon, un componente accessorio dell’oloenzima Pol ε che supporta la sintesi del DNA ad alta fedeltà durante la fase S e contribuisce alla replicazione del filamento guida. Attraverso l’accoppiamento con il replisoma, POLE2 aiuta a coordinare l’allungamento processivo del DNA, la stabilità della forcella di replicazione e la tolleranza al danno al DNA, collegando la replicazione del DNA alle vie di segnalazione dei checkpoint e di mantenimento del genoma. Alterazioni della funzione di Pol ε e lo stress replicativo sono associati a un aumento del carico mutazionale e dell’instabilità cromosomica, rendendo POLE2 un bersaglio utile per studiare i meccanismi che modellano l’integrità del genoma nelle cellule umane proliferanti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DNA pol ε B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene POLE2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del POLE2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto POLE2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DNA pol ε B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di POLE2 per lo studio della segnalazione di DNA pol ε B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni POLE2 critici per la funzione di DNA pol ε B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di POLE2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DNA pol ε B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DNA pol ε B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus POLE2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DNA pol ε B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DNA pol ε B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia POLE2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio POLE2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.