DNA pol ε B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-418231

概要

POLE2は、S期における高忠実度DNA合成を支え、リーディング鎖複製に寄与するPol εホロ酵素の補助因子であるDNAポリメラーゼεサブユニットBをコードします。POLE2はレプリソームとの共役を通じて、連続的なDNA伸長、複製フォークの安定性、DNA損傷耐性の協調を助け、DNA複製をチェックポイントシグナル伝達およびゲノム維持経路と結び付けます。Pol ε機能の変化や複製ストレスは、変異負荷の増大や染色体不安定性と関連しており、POLE2は増殖するヒト細胞におけるゲノム完全性を規定する機構の研究に有用な標的となります。

DNA pol ε B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPOLE2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、POLE2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、POLE2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DNA pol ε Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DNA pol ε Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、POLE2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DNA pol ε Bの機能に不可欠なPOLE2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、POLE2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DNA pol ε B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDNA pol ε B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、POLE2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DNA pol ε B HDRプラスミド（h）および DNA pol ε B HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPOLE2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPOLE2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。