DNA-PKCS Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400337-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- DNA-PKCSO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase DNA-PKCS (h) e o Plasmídeo Double Nickase DNA-PKCS (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para PRKDC. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:DNA-PKCS Anticorpo (G-12): sc-390849
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
DNA-PKCS Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400337-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DNA-PKCS Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400337-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKDC codifica a subunidade catalítica da proteína quinase dependente de DNA, DNA-PKCS, um regulador central do reparo de quebras de dupla fita do DNA pela via clássica de junção de extremidades não homólogas (c-NHEJ). Após a ligação de Ku70/Ku80 às extremidades do DNA, a DNA-PKCS é recrutada e ativada para coordenar a sinapse das extremidades, o processamento e a ligação, e também contribui para a recombinação V(D)J durante o desenvolvimento de linfócitos. A sinalização da DNA-PKCS interage com redes de vigilância do genoma, incluindo respostas a dano no DNA mediadas por ATM/ATR, influenciando o controle de checkpoints do ciclo celular e a dinâmica da cromatina. Alterações na função ou na expressão de PRKDC estão associadas a instabilidade genômica, fenótipos de radiossensibilidade e dependências de reparo de DNA relacionadas ao câncer, tornando-o amplamente estudado em mecanismos de estresse genotóxico e resistência.
DNA-PKCS O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus PRKDC em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de PRKDC. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função PRKDC. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com PRKDC interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.