Dlx-3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405063-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- Dlx-3 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- Dlx-3ダブルニカースプラスミド（h）およびDlx-3ダブルニカースプラスミド（h2）は、DLX3を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: Dlx-3 抗体 (B-5): sc-514094
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
Dlx-3 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-405063-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Dlx-3 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-405063-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DLX3は、ホメオボックス型転写因子Dlx-3をコードしており、配列特異的にDNAへ結合して遺伝子発現を制御する調節因子として、上皮分化、毛包および歯の発生、ならびに胎盤における栄養膜（トロフォブラスト）機能に必要な遺伝子プログラムを統合的に調整します。Dlx-3は、発生過程の転写ネットワークと連携しつつ、角化細胞（ケラチノサイト）の成熟、細胞外マトリックスのリモデリング、形態形成を制御する経路に影響を与えることで、細胞運命決定を調節します。DLX3活性の変化は、トリコ・デント・オッセオウス症候群を含む外胚葉異形成の表現型と関連づけられており、その制御異常は、頭蓋顔面パターニングやバリア形成の基盤機構を研究するためのモデルとして利用されています。ヒト細胞モデルでは、DLX3の機能撹乱を用いることで、系譜特異的な転写回路や分化依存的な遺伝子発現を解析するための扱いやすい手段が得られます。
Dlx-3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DLX3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DLX3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DLX3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DLX3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。