Dicer Double Nickaseプラスミド (h): sc-400365-NIC

DICER1は、前駆体ヘアピンを約21～23 ntの小分子RNAへと切断・加工することで、microRNAおよびsiRNAの生合成に必須のRNase IIIエンドヌクレアーゼであるDicerをコードしています。Dicerはこれらの小分子RNAをArgonauteを含むRISC複合体に取り込ませることで、転写後の遺伝子サイレンシングを制御し、分化・増殖・ストレス応答を制御する経路に影響を与えます。DICER1依存的な小分子RNAネットワークは、反復配列（リピート要素）の活性や二本鎖切断（double-strand break）応答を調節することを通じて、ゲノム安定性や自然免疫シグナル伝達にも関与します。DICER1の機能異常や変異はmicroRNA恒常性を乱し、さまざまな疾患状況における遺伝子発現プログラムの変化と関連するため、RNA干渉やトランスクリプトーム制御の機構研究における重要な標的となっています。

Dicer ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における DICER1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、DICER1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、DICER1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、DICER1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。