Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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DHFR Plasmide Double Nickase (h): sc-416991-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DHFRL1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DHFRL1 Double Nickase Plasmid (h) e il DHFRL1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DHFR2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DHFR Plasmide Double Nickase (h) | sc-416991-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DHFRL1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-416991-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il DHFR2 umano codifica la diidrofolato reduttasi (DHFR), un enzima NADPH-dipendente che catalizza la riduzione del diidrofolato a tetraidrofolato, mantenendo il metabolismo a un carbonio necessario per la biosintesi de novo di timidilato e purine. Attraverso il suo ruolo nel ciclo dei folati, la DHFR supporta la replicazione e la riparazione del DNA, la progressione del ciclo cellulare e la capacità di metilazione cellulare tramite il collegamento al metabolismo della metionina/S-adenosilmetionina. L’alterazione dell’attività della DHFR influenza l’equilibrio dei pool nucleotidici e la stabilità del genoma, processi frequentemente analizzati in contesti di stress proliferativo e rimodellamento metabolico. La biologia della DHFR è quindi ampiamente sfruttata per studiare le vie biosintetiche dipendenti dai folati e le risposte cellulari alla deplezione di nucleotidi e allo stress replicativo.
DHFRL1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DHFR2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DHFR2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DHFR2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DHFR2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.