Dexras2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (r): sc-437366-ACT

Dexras2 é uma pequena GTPase relacionada à família Ras, enriquecida no sistema nervoso, que atua como um transdutor de sinais, conectando entradas dependentes de receptores e de cálcio às vias downstream de MAPK e de nucleotídeos cíclicos. Em neurônios de rato, tem sido implicada na modulação da plasticidade sináptica e da sinalização circadiana, integrando sinais provenientes da atividade de GPCRs e de vias relacionadas ao óxido nítrico para moldar respostas transcricionais e eletrofisiológicas. Processos associados à Dexras2 incluem a regulação do ciclo da GTPase, interações proteína–proteína em compartimentos sinápticos e programas de expressão gênica dependentes de atividade. A desregulação de redes de sinalização da família Ras e de vias de plasticidade neuronal nas quais a Dexras2 participa é relevante para estudos mecanísticos de fenótipos neuropsiquiátricos e neurodegenerativos, sem implicar desfechos clínicos.

Dexras2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (r) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Dexras2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (r) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição , onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Dexras2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Dexras2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Dexras2 em células tumorais com expressão de silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.