DET1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406735

Panoramica

DET1 (de-etiolated homolog 1) codifica un regolatore nucleare conservato che funge da piattaforma (scaffold) all’interno del macchinario della ligasi E3 dell’ubiquitina CUL4–DDB1, contribuendo a coordinare il turnover proteico dipendente dall’ubiquitina. Attraverso questo complesso, DET1 partecipa al controllo trascrizionale e a processi associati alla cromatina che influenzano la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e la proteostasi. L’attività di DET1 si interseca con programmi di segnalazione regolati dall’ubiquitinazione, incluse vie che incidono sull’espressione genica legata alla proliferazione e all’adattamento allo stress. La disregolazione della funzione di ligasi dell’ubiquitina associata a DET1 è stata collegata ad alterazioni delle reti trascrizionali e a fenotipi di instabilità genomica rilevanti per la biologia del cancro e per altri disturbi caratterizzati da squilibri della proteostasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DET1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DET1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DET1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DET1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DET1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DET1 per lo studio della segnalazione di DET1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DET1 critici per la funzione di DET1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DET1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DET1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DET1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DET1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DET1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DET1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DET1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DET1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.