desmoplakin I/II Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400818-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- desmoplakin I/IIO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase desmoplakin I/II (h) e o Plasmídeo Double Nickase desmoplakin I/II (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para DSP. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:desmoplakin I/II Anticorpo (A-1): sc-390975
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
desmoplakin I/II Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400818-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
desmoplakin I/II Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400818-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DSP codifica a desmoplaquina I/II, um componente central da família plakin dos desmossomos, que ancora os filamentos intermediários às placas desmossomais para manter a integridade mecânica em epitélios e no tecido cardíaco. Ao conectar redes de queratina ou desmina a complexos desmogleína/desmocolina–plakoglobina–plakofilina, a desmoplaquina sustenta a estabilidade das junções, a organização do citoesqueleto e vias de mecanotransdução que coordenam a resiliência dos tecidos. A perturbação de DSP compromete a montagem dos desmossomos e a fixação dos filamentos intermediários, levando a defeitos de adesão célula–célula e a alterações na sinalização de estresse. A disfunção de DSP está associada a doenças hereditárias e adquiridas caracterizadas por fragilidade cutânea e fenótipos de cardiomiopatia, tornando-o um alvo importante para o estudo da biologia das junções e dos mecanismos de integridade tecidual.
desmoplakin I/II O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus DSP em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de DSP. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função DSP. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com DSP interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.