Plásmido Doble Nickase (h) Desmin: sc-400248-NIC

DES codifica desmina, una proteína de filamento intermedio de tipo III que forma un armazón esencial que conecta los discos Z, el sarcolema, las mitocondrias y los núcleos en el músculo estriado y liso. La desmina integra la arquitectura del citoesqueleto con la mecanotransducción, el posicionamiento de orgánulos y las respuestas al estrés celular, favoreciendo la alineación de las miofibrillas y la función contráctil. Participa en el ensamblaje de filamentos intermedios y en la comunicación cruzada con las redes de actina y microtúbulos, lo que influye en la diferenciación de las células musculares y en la remodelación estructural. Las variantes patogénicas de DES y la alteración de la organización de la desmina se asocian con miopatías y cardiomiopatías relacionadas con desmina, caracterizadas por agregados citoplasmáticos de desmina y un deterioro de la integridad muscular, lo que convierte a DES en un locus clave para estudiar los mecanismos de degeneración muscular.

Desmin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DES en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DES. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DES. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DES alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.