Plásmido CRISPR de Activación (h) DEP-1: sc-402501-ACT

PTPRJ codifica DEP-1, una fosfatasa de tirosina de proteínas de tipo receptor enriquecida en la membrana plasmática, donde contrarresta la señalización de las tirosina quinasas receptoras. Al desfosforilar sustratos implicados en vías como EGFR/ERK y PI3K/AKT, DEP-1 modula la proliferación, la adhesión, la migración y el control del crecimiento dependiente del contacto. La actividad de DEP-1 se cruza con programas del citoesqueleto y de las uniones celulares, influyendo en la biología de las barreras endoteliales y epiteliales, así como en los umbrales de señalización de las células inmunitarias. La expresión o función alteradas de PTPRJ se han asociado con redes de señalización desreguladas observadas en múltiples contextos de cáncer y fenotipos inflamatorios, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la homeostasis de la fosfotirosina.

DEP-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PTPRJ sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DEP-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PTPRJ en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PTPRJ, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DEP-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PTPRJ y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DEP-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DEP-1 en células tumorales con expresión de PTPRJ silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.