DENND4A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407301

Visão geral

DENND4A codifica uma proteína contendo domínio DENN que atua como fator de troca de nucleotídeos de guanina (GEF) para GTPases Rab, dando suporte ao tráfego endossomal e à reciclagem de membrana. Por meio da regulação do transporte vesicular dependente de Rab, a DENND4A contribui para a triagem de cargas, a renovação de receptores e a organização espacial de complexos de sinalização que conectam a dinâmica de membranas a vias a jusante. Sua atividade está ligada a processos como detecção de nutrientes, remodelamento do citoesqueleto e sinalização compartimentalizada em endomembranas, tornando-a relevante para estudos de crescimento celular e adaptação ao estresse. A desregulação do tráfego vesicular e do controle da rede Rab é frequentemente associada à sinalização oncogênica, ao desequilíbrio metabólico e a fenótipos relacionados à neurobiologia, posicionando a DENND4A como um nó útil para dissecar mecanismos de doença associados ao tráfego intracelular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO DENND4A (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene DENND4A em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do DENND4A, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do DENND4A na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína DENND4A.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de DENND4A para a investigação da sinalização de DENND4A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) DENND4A críticos para a função DENND4A
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos DENND4A para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo DENND4A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo DENND4A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus DENND4A. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo DENND4A Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR DENND4A (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia DENND4A para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo DENND4A definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.