DDX30 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411632-ACT

DHX30（DDX30）は、ATP依存性のDEAD-box型RNAヘリカーゼをコードしており、RNA二次構造を調節することで、転写制御、RNAプロセシング、翻訳などを含むRNA代謝を支えます。ヘリカーゼとしてのDDX30は、リボヌクレオタンパク質（RNP）の再構築やRNA品質管理プロセスに関与し、細胞ストレス応答やミトコンドリアおよび細胞質の遺伝子発現プログラムに影響を与えます。RNAヘリカーゼ活性の変化は、RNAセンシングや転写産物の運命に及ぼす作用を通じて、プロテオスタシスおよび自然免疫シグナル伝達ネットワークを撹乱し得ます。DHX30の制御異常は、神経発達に関連する表現型や、より広範な疾患関連のトランスクリプトーム変化と関連づけられており、ヒト細胞におけるRNA中心のメカニズムを研究するうえで有用なノードとなります。

DDX30 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DHX30の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

DDX30 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DHX30 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDHX30転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性DDX30の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDHX30遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDDX30依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDHX30発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDDX30経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。