DDX27 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409574-ACT

DDX27 codifica uma helicase de RNA do tipo DEAD-box localizada no nucléolo, que participa do processamento do pré-rRNA e da biogênese ribossomal, sustentando a montagem eficiente das subunidades ribossomais grandes e a capacidade translacional global. Ao remodelar complexos RNA–proteína no nucléolo, a DDX27 contribui para a regulação de programas de crescimento e proliferação celular que dependem de uma síntese proteica rigidamente controlada. A disrupção da produção de ribossomos e da homeostase nucleolar está associada à sinalização de estresse celular e a alterações de diferenciação, tornando a DDX27 relevante para estudos de ribossomopatias e da reprogramação translacional associada ao câncer. A atividade aberrante de DDX27 tem sido associada a fenótipos proliferativos e a defeitos em processos miogênicos e de desenvolvimento em sistemas modelo, apoiando seu uso como um nó mecanístico em pesquisas sobre metabolismo de RNA.

DDX27 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DDX27 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DDX27 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DDX27 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DDX27, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DDX27. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DDX27 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DDX27 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DDX27 em células tumorais com expressão de DDX27 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.