DCST2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405719-ACT

DCST2 (proteína 2 contendo domínio DC-STAMP) é uma proteína de membrana multipasso implicada em processos de interação célula–célula e em eventos relacionados à fusão de membranas, com as evidências funcionais mais robustas provenientes de seus papéis na interação entre gametas e na biologia da fertilização. Em tecidos humanos, os padrões de expressão de DCST2 sustentam a investigação de programas regulatórios do trato reprodutivo e de células germinativas, incluindo a organização de membrana e a sinalização em junções celulares especializadas. Embora os detalhes mecanísticos ainda estejam sendo ativamente estudados, alterações na expressão ou na regulação de DCST2 podem ser relevantes para fenótipos associados à infertilidade e para contextos mais amplos de diferenciação epitelial. Como fator associado à membrana, DCST2 pode ser usado para investigar vias que ligam a composição de proteínas de superfície à comunicação celular e à biologia do desenvolvimento.

DCST2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DCST2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DCST2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DCST2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DCST2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DCST2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DCST2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DCST2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DCST2 em células tumorais com expressão de DCST2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.