DBH Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402441-ACT

A dopamina beta-hidroxilase (DBH) codifica uma monooxigenase dependente de cobre que catalisa a conversão de dopamina em norepinefrina, uma etapa-chave na biossíntese de catecolaminas em neurônios simpáticos e em células cromafins da medula adrenal. A atividade da DBH sustenta o metabolismo vesicular de neurotransmissores e se integra a vias conduzidas pela tirosina hidroxilase que regulam a sinalização adrenérgica, as respostas neuroendócrinas ao estresse e a homeostase cardiovascular. Alterações na expressão da DBH ou em sua função enzimática têm sido associadas a níveis desregulados de norepinefrina e são estudadas no contexto de características neuropsiquiátricas e de disfunção autonômica. Como leitura molecular do estado catecolaminérgico, a DBH é amplamente utilizada para investigar a identidade da linhagem noradrenérgica, a maturação neuronal e a remodelação de neurotransmissores dependente de estímulos.

DBH O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DBH sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DBH O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DBH em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DBH, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DBH. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DBH nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DBH no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DBH em células tumorais com expressão de DBH silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.