DAGLα CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402826

概要

DAGLAは、膜結合型のセリン加水分解酵素であるジアシルグリセロールリパーゼα（DAGLα）をコードしています。DAGLαはジアシルグリセロールを加水分解して、主要な内因性カンナビノイド脂質メディエーターである2-アラキドノイルグリセロール（2-AG）を産生します。2-AG産生を制御することで、DAGLαは逆行性シナプス伝達、CB1受容体の活性化、ならびに活動依存的な神経伝達物質放出の調節に影響し、脂質代謝と神経の興奮性・可塑性を結び付けています。DAGLαの活性は、ホスホリパーゼC–ジアシルグリセロールシグナル伝達や、炎症および細胞ストレス応答を形作る、より広範なアラキドン酸関連の脂質ネットワークとも連関しています。DAGLA依存的な内因性カンナビノイドのトーンの変化は、神経発達および神経精神系の表現型と関連づけられており、てんかん、疼痛処理、代謝調節異常といった文脈で研究されています。

DAGLα CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるDAGLA遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、DAGLA内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、DAGLAのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、DAGLαタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、DAGLαシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、DAGLA欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• DAGLαの機能に不可欠なDAGLAエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、DAGLAゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• DAGLα CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびDAGLα CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、DAGLA遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  DAGLα HDRプラスミド（h）および DAGLα HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはDAGLAホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のDAGLA標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。