D5DR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404047-ACT

DRD5 codifica o receptor humano de dopamina D5 (D5DR), um receptor acoplado à proteína G que se acopla principalmente a Gs/olf para estimular a adenilil ciclase, elevar os níveis de cAMP e ativar a sinalização dependente de PKA. O D5DR modula a excitabilidade neuronal e a plasticidade sináptica por meio da regulação de canais iônicos e de redes de fosforilação, além de interagir com MAPK/ERK e outras vias de segundos mensageiros a jusante da neurotransmissão dopaminérgica. A expressão e a sinalização de DRD5 são estudadas no contexto do funcionamento de circuitos dopaminérgicos, de fenótipos neurocomportamentais e do cross-talk entre receptores que molda as respostas à sinalização por catecolaminas. A desregulação da sinalização de receptores de dopamina, incluindo alterações na atividade do D5DR, é relevante para pesquisas sobre transtornos neuropsiquiátricos e do neurodesenvolvimento e sobre mecanismos de dessensibilização e tráfego de receptores.

D5DR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DRD5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

D5DR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DRD5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DRD5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de D5DR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DRD5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de D5DR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via D5DR em células tumorais com expressão de DRD5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.