D54 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425948

Descripción general

Tpd52l2 codifica D54, un miembro de la familia de proteínas tumorales D52 implicada en la regulación del tráfico vesicular, la dinámica de membranas y los procesos secretorios que influyen en el crecimiento y la diferenciación celular. D54 se ha relacionado con vías que gobiernan el transporte intracelular y la organización del citoesqueleto, favoreciendo la entrega coordinada de componentes de señalización y proteínas de membrana. La expresión alterada de proteínas de la familia D52 se observa con frecuencia en contextos proliferativos y metabólicos, lo que convierte a Tpd52l2 en un nodo útil para estudiar la desregulación del control del ciclo celular y la remodelación adaptativa al estrés. En sistemas murinos, Tpd52l2 ofrece una diana manejable para dilucidar cómo las proteínas asociadas al tráfico modulan la salida de señalización y la homeostasis tisular en modelos relevantes de enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO D54 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tpd52l2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tpd52l2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tpd52l2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína D54.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tpd52l2 para la investigación de la señalización de D54, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tpd52l2 críticos para la función de D54
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tpd52l2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido D54 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido D54 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tpd52l2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR D54 (m) y el plásmido HDR D54 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tpd52l2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tpd52l2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.