D54 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-425948

概要

Tpd52l2はD54をコードしており、D54は腫瘍タンパク質D52ファミリーの一員で、細胞増殖や分化に影響する小胞輸送、膜動態、分泌過程の制御に関与するとされています。D54は細胞内輸送や細胞骨格の構築を司る経路との関連が示されており、シグナル伝達因子や膜タンパク質を協調的に運搬・供給する仕組みを支えます。D52ファミリータンパク質の発現異常は、増殖や代謝に関わる状況でしばしば観察されるため、Tpd52l2は、細胞周期制御の破綻やストレス適応的なリモデリングを研究するうえで有用な結節点となります。マウス系では、Tpd52l2は、輸送関連タンパク質がシグナル出力や組織恒常性をどのように調節するかを、疾患関連モデルで解析するための扱いやすい標的になります。

D54 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTpd52l2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tpd52l2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tpd52l2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、D54タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、D54シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tpd52l2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• D54の機能に不可欠なTpd52l2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tpd52l2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• D54 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびD54 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tpd52l2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  D54 HDRプラスミド（m）および D54 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTpd52l2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTpd52l2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。