Cytokeratin 6A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401650

概要

KRT6Aはサイトケラチン6Aをコードしており、これはII型の中間径フィラメントタンパク質で、I型ケラチンとヘテロ二量体を形成して、重層上皮におけるケラチン細胞骨格を構築します。サイトケラチン6Aは機械的な強度（耐性）を支え、創傷修復時の細胞骨格リモデリングを協調させるとともに、上皮分化を形作る細胞接着構造の組織化やストレス応答プログラムとも連関します。その発現は過増殖性のケラチノサイトでしばしば誘導され、KRT6Aが上皮の再生やバリア維持を制御する経路と結び付くことを示しています。サイトケラチン6Aの制御異常は、遺伝性および後天性の角化異常症に関与するとされ、上皮性腫瘍の文脈でも一般的に観察されるため、上皮の可塑性や疾患関連の細胞骨格変化を研究する上で重要です。

Cytokeratin 6A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKRT6A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KRT6A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KRT6Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Cytokeratin 6Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Cytokeratin 6Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KRT6A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Cytokeratin 6Aの機能に不可欠なKRT6Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KRT6Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Cytokeratin 6A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCytokeratin 6A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KRT6A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Cytokeratin 6A HDRプラスミド（h）および Cytokeratin 6A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKRT6Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKRT6A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。