Cytokeratin 18 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400305

概要

KRT18は、タイプIの中間径フィラメントタンパク質であるサイトケラチン18をコードしており、ケラチン8とヘテロ重合して、単層上皮細胞の中核的な細胞骨格ネットワークを形成します。このフィラメント系は細胞構造と機械的強度を支えるとともに、接着結合複合体、オルガネラの配置、ならびに細胞周期の進行とアポトーシスを調整するストレス応答シグナルとも連携します。サイトケラチン18の動態はリン酸化やプロテアーゼによるプロセシングによって制御され、有糸分裂時や細胞ストレス時の細胞骨格リモデリングと関連づけられています。KRT18の発現異常やフィラメント構造の乱れは、上皮状態のマーカーとしてしばしば用いられ、上皮損傷、炎症、腫瘍細胞生物学といった文脈で研究されています。

Cytokeratin 18 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKRT18遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KRT18内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KRT18のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Cytokeratin 18タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Cytokeratin 18シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KRT18欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Cytokeratin 18の機能に不可欠なKRT18エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KRT18ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Cytokeratin 18 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCytokeratin 18 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KRT18遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Cytokeratin 18 HDRプラスミド（h）および Cytokeratin 18 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKRT18ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKRT18標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。