Cytokeratin 13 Plasmide Double Nickase (h): sc-401320-NIC

KRT13 codifica la citocheratina 13, una proteina dei filamenti intermedi di tipo I che si appaia con altre cheratine per formare la rete citoscheletrica tipica degli epiteli stratificati non cornificati. La citocheratina 13 contribuisce all’integrità strutturale dell’epitelio, all’adesione cellula–cellula e alla resistenza allo stress organizzando l’assemblaggio dei filamenti e coordinandosi con i complessi desmosomiali ed emidesmosomiali. La sua espressione è regolata durante la differenziazione epiteliale e i programmi di rimodellamento che si intersecano con la risposta alle ferite e il mantenimento della barriera. Alterazioni dei pattern di espressione di KRT13 sono studiate nella displasia epiteliale e nei cambiamenti di differenziazione associati al carcinoma, rendendolo un marcatore utile per indagare lo stato di cheratinizzazione e la plasticità di linea dell’epitelio.

Cytokeratin 13 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KRT13 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KRT13. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KRT13. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KRT13 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.