cytoglobin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402949

概要

CYGBは、複数の組織で発現する六配位型グロビンであるサイトグロビンをコードしており、酸素および一酸化窒素に結合して細胞のレドックス恒常性に寄与する。サイトグロビンは酸化ストレスおよびニトロソ化ストレスからの防御に関与し、低酸素応答性シグナル伝達、活性酸素種（ROS）の処理、一酸化窒素（NO）代謝に影響を与える。これらの過程を通じて、CYGBは線維芽細胞の活性化、血管機能、低酸素微小環境への細胞適応の制御と関連づけられている。CYGB発現の変化は、腫瘍生物学、炎症性ストレス、臓器線維化に関わる状況で報告されており、経路および表現型研究における機構的ターゲットとしての有用性を支持している。

cytoglobin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCYGB遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CYGB内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CYGBのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、cytoglobinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、cytoglobinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CYGB欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• cytoglobinの機能に不可欠なCYGBエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CYGBゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• cytoglobin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびcytoglobin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CYGB遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  cytoglobin HDRプラスミド（h）および cytoglobin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCYGBホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCYGB標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。