cytochrome c CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-417607

概要

CYCSはヒトのシトクロムcをコードしており、ミトコンドリア膜間腔に存在するヘム含有の電子キャリアとして、複合体III（シトクロムbc1）から複合体IV（シトクロムcオキシダーゼ）へ電子を受け渡すことで、酸化的リン酸化および細胞内ATP産生を支えています。エネルギー代謝にとどまらず、シトクロムcは内因性アポトーシスの中心的メディエーターでもあり、ミトコンドリア外膜透過化によって細胞質へ放出された後、APAF1およびカスパーゼ9とともにアポトソームを形成します。CYCSの機能は、レドックス恒常性、ミトコンドリア動態、ストレス応答シグナル伝達とも交差しており、ミトコンドリア機能不全の研究全般に広く関与します。シトクロムc依存的な呼吸の変化やアポトーシス実行能の変動は、神経変性、心血管・代謝性障害、がん細胞の生存表現型といった文脈でしばしば検討されます。

cytochrome c CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCYCS遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CYCS内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CYCSのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、cytochrome cタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、cytochrome cシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CYCS欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• cytochrome cの機能に不可欠なCYCSエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CYCSゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• cytochrome c CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびcytochrome c CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CYCS遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  cytochrome c HDRプラスミド（h）および cytochrome c HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCYCSホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCYCS標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。