CYTIP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-432749

概要

Cytip（cytohesin 1 interacting protein）は、cytohesin/ARF GTPaseシグナル伝達を調節し、インテグリン依存的な接着と細胞骨格リモデリングの協調を助けるアダプタータンパク質CYTIPをコードします。免疫細胞では、CYTIPはLFA-1/ICAM相互作用を調整するインサイドアウトシグナル伝達に関与し、白血球の運動性、免疫シナプスの安定性、細胞間接触のダイナミクスに影響します。これらの役割を通じて、Cytipはリンパ球の活性化、遊走、組織浸潤を制御する経路と関連しており、免疫制御や炎症関連表現型の機序解明研究において重要です。そのため、マウスCytipの改変は、接着シグナルがin vivoおよび培養免疫モデルにおいて下流の極性化やトラフィッキング（輸送）プログラムとどのように連動するかを解析するうえで有用です。

CYTIP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCytip遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cytip内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cytipのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CYTIPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CYTIPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cytip欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CYTIPの機能に不可欠なCytipエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cytipゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CYTIP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCYTIP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cytip遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CYTIP HDRプラスミド（m）および CYTIP HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCytipホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCytip標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。